引言
第一章  建立哺乳动物细胞表面抗体展示技术平台
  第一节  多样化的抗体筛选技术
    一、杂交瘤技术
    二、B淋巴细胞单克隆技术
    三、细胞表面抗体展示技术
    四、哺乳动物细胞表面全长抗体展示技术
  第二节  全长抗体在哺乳动物细胞表面的展示和分析
    一、单基因表达系统的选择
    二、分泌型全长抗体的表达和分析
    三、展示型全长抗体的表达和分析
    四、抗原与展示型抗体的结合具有剂量依赖性
  第三节  同步表达展示型和分泌型抗体
    一、FCS（Furin切割序列）
    二、表达载体的设计和构建
    三、抗体表达细胞
    四、展示型抗体的分析
    五、分泌型抗体的分析
第二章  哺乳动物细胞表面抗体展示技术平台的应用
  第一节  筛选抗原特异性抗体
  第二节  分析不同抗体的表达强度
    一、抗体的选择
    二、具体的实验和分析过程
  第三节  筛选高亲和力抗体
  第四节  分析鉴定中和抗体
第三章  应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术优化抗体亲和力
  第一节  随机突变展示型抗体基因库的构建及分析
    一、抗体及突变位点的选择
    二、突变方案及引物设计
    三、抗体基因库的构建及分析
  第二节  细胞水平抗体库的构建及高中和活性抗体的筛选
    一、细胞库的构建及分析
    二、阳性抗体克隆的分选与分析
    三、阳性抗体突变位点氨基酸的变化与中和活性的提高
第四章  展示型全长人源一级抗体库的构建及分析
  第一节  表达载体的构建
    一、启动子的选择
    二、限制性内切酶的选择
  第二节  抗体基因库的扩增
    一、基本思路
    二、设计合成扩增引物
    三、外周血淋巴细胞总RNA提取
    四、基因库cDNA第一链的合成
  第三节  抗体库的常规构建
  第四节  抗体库的快速构建
    人源抗体重链可变区和全长轻链基因扩增引物的分组
第五章  定向快速高效多片段分子克隆与二级抗体库的构建
  第一节  需求与可行性
  第二节  双表达载体的设计与构建
    一、双表达载体需要的功能组分
    二、双表达载体的设计
    三、引物的设计及DNA片段的PCR合成
    四、4片段定向连接构建双表达载体
    五、分析双表达载体的抗体表达功能
    六、4个片段的自我连接与定向连接分析
    七、4片段定向连接效率分析
  第三节  用4片段定向连接快速高效构建二级抗体库
第六章  乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体的筛选
  第一节  从抗体库筛选特异性抗体的思路
    一、一级抗体库的特点及筛选难度
    二、二级抗体库与定点整合系统的局限性
    三、从细胞展示抗体库中筛选特异性抗体的设想
    四、从定点整合二级免疫抗体库开始是一个可行的方案
  第二节  乙型肝炎特异性一级库的构建及分析
    一、为什么选择筛选乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
    二、PBMC的需求及总RNA的提取
    三、一级抗体库的库容及质量分析
  第三节  双表达定点整合乙型肝炎特异性抗体库的构建及分析
    一、载体水平定点整合乙型肝炎特异性抗体库的库容及质量分析
    二、定点整合抗体稳定表达细胞库的构建及质量分析
    三、稳定表达细胞库的质量分析及保存
  第四节  乙型肝炎表面抗原特异性抗体的筛选与鉴定
    一、抗原的确定和处理
    二、表达抗HBsAg抗体细胞的富集
    三、表达抗HBsAg抗体单细胞克隆的分析鉴定
第七章  实战技巧专题讨论
  第一节  分子生物学研究实验材料的特点及操作技巧
    一、DNA与PCR
    二、RNA与基因克隆
    三、蛋白质的稳定性及其变性
    四、几种特殊情况下的实用技巧
  第二节  影响小提RNA质量和产量的因素
    一、RNA酶与RNA的质量产量
    二、总RNA小提技巧
  第三节  质粒DNA的提取与鉴定
    一、影响小提质粒DNA产量质量的因素
    二、质粒DNA小提技巧
    三、阳性细菌克隆的筛选
    四、质粒DNA中提实例
  第四节  琼脂糖凝胶电泳操作技巧
    一、DNA琼脂糖凝胶电泳的考虑因素
    二、DNA琼脂糖凝胶电泳操作技巧
    三、实例分析：用一块凝胶同步分析从0.5kb到10kb的DNA片段
  第五节  抗体库的构建与分析
    一、构建大容量抗体基因库需要考虑的因素
    二、抗体库轻重链的配对分析与保存
    三、抗体稳定表达细胞库的构建、染色、分析和分选
  第六节  细胞生物学研究实验材料的特点及操作技巧
    一、细胞的培养与传代
    二、细胞的冻存与复苏
参考文献